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當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章ChromoTek介紹

ChromoTek介紹

更新時(shí)間:2019-05-08點(diǎn)擊次數(shù):3221

 

ChromoTek介紹

德國(guó)ChromoTek公司成立于2008年,致力于細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究,公司擁有強(qiáng)大的研發(fā)團(tuán)隊(duì),有先進(jìn)的生物制劑,主要主要使命是花費(fèi)較少的時(shí)間和成本,使客戶獲得得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

 

德國(guó)ChromoTek公司 聯(lián)合中國(guó)專業(yè)的生物技術(shù)服務(wù)提供商-BioTNT,針對(duì)中國(guó)市場(chǎng)的實(shí)際情況,推出全世界可靠的GFP 相關(guān)產(chǎn)品。

 

ChromoTek的產(chǎn)品分類:

 

一、Nano-Trap系列;以產(chǎn)品結(jié)合物為標(biāo)準(zhǔn),包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列,還有96板系列;抗體結(jié)合物包括GFP Trap,RFP Trap,GST Trap,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/ HdmX-Trap

二、 Booster系列;含GFP booster RFP booster;

三、 可用于HCA 實(shí)驗(yàn)的Chromobodies(質(zhì)粒或細(xì)胞系形式);

四、  高品質(zhì)抗體(標(biāo)簽蛋白抗體和普通抗體);

 

產(chǎn)品一

GFP-Trap?  —— 值得信賴的科研工具

Nano-Trap:agarose beads或者magnetic beads結(jié)合,在免疫沉淀或蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)中,可抓取或純化GFP或RPF融合蛋白。 (優(yōu)點(diǎn):三好三多)

優(yōu)點(diǎn)一:抗體好---------Nano-Traps采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段VHHS;具有分子量?。?5Kda)、穩(wěn)定(70℃仍保持穩(wěn)定),高親和力(高特異性性結(jié)合GFP蛋白),無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點(diǎn)等優(yōu)點(diǎn);GFP抗體可以特異性結(jié)合綠色熒光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65T,TagGFP,不與RFP衍生蛋白結(jié)合。

優(yōu)點(diǎn)二:形式好-------抗體結(jié)合了agarose beads(瓊脂糖珠子)或者magnetic beads(磁珠),在IP實(shí)驗(yàn),COIP ,pulldown,Chip實(shí)驗(yàn)中可以直接取代特異性GFP 抗體+proteinA/G 瓊脂糖珠子;

優(yōu)點(diǎn)三:效果好------孵化時(shí)間短(只需5-30min),能夠更好與結(jié)合,從細(xì)胞提取物或細(xì)胞器中定量分離GFP融合蛋白及結(jié)合因子

優(yōu)點(diǎn)四:實(shí)驗(yàn)應(yīng)用多:被廣泛用于免疫沉淀、質(zhì)譜分析、酶活測(cè)定、生物大分子相互作用/親和力實(shí)驗(yàn)、染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)、蛋白質(zhì)相互作用分析;

優(yōu)點(diǎn)五:產(chǎn)品多:有GFP Trap,RFP Trap,GST Trap,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/ HdmX-Trap NEW!更多Trap 新品,給您提供更多的科研工具!GFP,RFP,GST Trap作為標(biāo)簽蛋白的特異性純化方法,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/ HdmX-Trap 是用于純化目的蛋白。

優(yōu)點(diǎn)六:樣品類型多:mammalian cells(哺乳細(xì)胞);tissues/ organisms(組織/器官樣本);bacteria(細(xì)菌);yeast (酵母);plants (植物樣本)

 

僅需六個(gè)步驟,30min 僅需6個(gè)步驟,30min 實(shí)驗(yàn),Chromotek GFP-Trap?_A5大實(shí)驗(yàn)應(yīng)用


 →→ →收集細(xì)胞     細(xì)胞裂解      平衡beads      結(jié)合蛋白 ,加入裂解的細(xì)胞   →    清洗beads   →  洗脫蛋白

 

 

 

免疫沉淀

酶活測(cè)定

Co-IP

Pull down

ChIP

后期實(shí)驗(yàn)

Western blot

酶活測(cè)定

沉淀的蛋白質(zhì)復(fù)合物采用SDS-Page 跑膠,western blot鑒定預(yù)測(cè)作用蛋白Y,或樣品利用質(zhì)譜后續(xù)分析。

洗脫的復(fù)合物;同時(shí)進(jìn)行GFP和第二標(biāo)簽western blot 實(shí)驗(yàn)。

交聯(lián)反應(yīng)逆轉(zhuǎn),DNA純化,DNA鑒定(如用QPCR 或者chip實(shí)驗(yàn)),同普通CHIP   實(shí)驗(yàn)

nano trap替代的產(chǎn)品

GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GST   標(biāo)簽蛋白的親和層析柱或瓊脂糖微珠

GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

目的

弱GFP蛋白樣品的富集;或后期實(shí)驗(yàn)

可以用beads直接測(cè)定酶活

蛋白-蛋白相互作用,一般驗(yàn)證體內(nèi)的蛋白互作

蛋白-蛋白相互作用,一般驗(yàn)證體外的蛋白互作

蛋白-DNA相互作用

 

 

(1實(shí)驗(yàn)不同,裂解的細(xì)胞不同;pulldown 加入的是GFP融合蛋白和第二標(biāo)簽融合蛋白的裂解物;chip實(shí)驗(yàn)為細(xì)胞固定步驟,染色質(zhì)斷裂步驟;

實(shí)驗(yàn)不同,加入的裂解物不同;chip實(shí)驗(yàn)加入的為斷裂的DNA-蛋白復(fù)合物;

 

(2) GFP-Trap 用于IP 實(shí)驗(yàn)(Immunoprecipitation)(免疫沉淀)Co-IP 實(shí)驗(yàn)(免疫共沉淀) :

 

Co-IP 實(shí)驗(yàn)(Co-Immunoprecipitation)(免疫共沉淀)原理圖

 

 

傳統(tǒng)IP

GFP-Trap用于IP

傳統(tǒng)Co-IP

GFP-Trap用于Co-IP

 

A

B

C

D

實(shí)驗(yàn)原理

抗體與細(xì)胞裂解液或上清中相應(yīng)蛋白結(jié)合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯(lián)的agarose珠子孵育,得到蛋白復(fù)合物,洗脫蛋白。

細(xì)胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白與GFP-Trap孵育,得到蛋白復(fù)合物,洗脫蛋白。

細(xì)胞非變性條件下裂解,完整胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。結(jié)合的實(shí)驗(yàn)原理同A/B

目的

得到純化的蛋白或進(jìn)行后期實(shí)驗(yàn)

同A

研究蛋白質(zhì)相互作用

后期實(shí)驗(yàn)

洗脫的蛋白采用SDS-Page 跑膠,采用GFP 抗體western blot進(jìn)行鑒定。

沉淀的蛋白質(zhì)復(fù)合物采用SDS-Page 跑膠,western blot 鑒定,也可利用質(zhì)譜進(jìn)行后續(xù)分析。

時(shí)間

長(zhǎng),超過一天

短,30min

同A

同B

步驟

多,超過20個(gè)步驟

少,僅需6個(gè)步驟

同A

同B

特異性

普通抗體特異性不高

羊駝抗體,特異性高

同A

同B

使用產(chǎn)品

可選用特異性抗體 或GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GFP抗體-瓊脂糖珠子,RFP-Trap,GST-Trap,Dnmt1-Trap

同A

同B

適用性

通用方法,適合面寬

有GFP,RFP,GST,Dnmt1-Trap等4個(gè)品種的標(biāo)簽蛋白Trap 可選

同A

同B

產(chǎn)物

純度不高

純度高,對(duì)比見下左圖

 

 

 

 


 

Nano-Traps主要產(chǎn)品見表:

  

 

 

品牌

貨號(hào)

品名

規(guī)格

價(jià)格

GFP-Trap?

Chromo tek

gta-10

GFP-Trap?, coupled to agarose

10 rxns

2000

Chromo tek

gta-20

GFP-Trap?, coupled to agarose

20 rxns

6700

Chromo tek

gta-100

GFP-Trap?, coupled to agarose

100 rxns

27090

Chromo tek

gta-200

GFP-Trap? coupled to agarose

200 rxns

48240

Chromo tek

gta-400

GFP-Trap? coupled to agarose

400 rxns

84330

Chromo tek

gtak-20

GFP-Trap? coupled to agarose kit

20 rxns

8400

Chromo tek

gtm-20

GFP-Trap? coupled to magnetic beads

20 rxns

6700

Chromo tek

gtm-100

GFP-Trap? coupled to magnetic beads

100 rxns

27090

Chromo tek

gtm-200

GFP-Trap? coupled to magnetic beads

200 rxns

5360

Chromo tek

gtp-96

GFP-multiTrap?, black 96 well plate

1 pc

4100

Chromo tek

gtp-96

GFP-multiTrap?, black 96 well plate

5 pc

15600

Chromo tek

gtm-400

GFP-Trap? coupled to magnetic beads

400 rxns

84330

Chromo tek

gtmk-20

GFP-Trap? coupled to magnetic beads kit

20 rxns

8400

Chromo tek

gt-250

GFP-Trap? free protein

250 μg

4500

RFP-Trap?

Chromo tek

rta 10

RFP-Trap?, coupled to agarose

10rxns

2000

Chromo tek

rta 20

RFP-Trap?, coupled to agarose

20rxns

6700

Chromo tek

rta 100

RFP-Trap?, coupled to agarose

100 rxns

27090

Chromo tek

rta200

RFP-Trap?, coupled to agarose

200rxns

5360

Chromo tek

rta 400

RFP-Trap?, coupled to agarose

400rxns

84330

Chromo tek

rtak-20

RFP-Trap?, coupled to agarose,

20 rxns

8400

Chromo tek

rt-250

RFP-Trap?, free protein

250 μg

4500

 GST-Trap

Chromo tek

stm-10

GST-Trap?, coupled to magnetic beads

10 rxns

2000

Chromo tek

stm-20

GST-Trap?, coupled to magnetic beads

20 rxns

6700

Chromo tek

stm-100

GST-Trap?, coupled to magnetic beads

100 rxns

27090

Chromo tek

stm-200

GST-Trap?, coupled to magnetic beads

200 rxns

48240

Chromo tek

stm-400

GST-Trap?, coupled to magnetic beads

400 rxns

84330

Chromo tek

stmk-20

GST-Trap?, coupled to magnetic beads, kit

20 rxns

8400

Chromo tek

st-250

GST-Trap?, free protein

250 μg

4500

Dnmt1-Trap

Chromo tek

dta-10

Dnmt1-Trap, coupled to agarose

10 rxns

2000

Chromo tek

dta-20

Dnmt1-Trap, coupled to agarose

20 rxns

6700

Chromo tek

dta-100

Dnmt1-Trap, coupled to agarose

100 rxns

27090

Chromo tek

dta-200

Dnmt1-Trap, coupled to agarose

200 rxns

48240

Chromo tek

dta-400

Dnmt1-Trap, coupled to agarose

400 rxns

84330

Chromo tek

dtak-20

Dnmt1-Trap, coupled to agarose, kit

20rxns

8400

Chromo tek

dt-250

Dnmt1-Trap,freeprotein

250μg

4500

Binding Controls

Chromo tek

bab-20

Blocked agarose beads (binding control)

500 μl (20 rxns)

1500

Chromo tek

bmp-20

Blocked magnetic particles ( binding control)

500 μ l ( 20 rxns)

1500

 

 

產(chǎn)品二:

 

 

 

Nano-booster是利用Atto公司的熒光素共價(jià)結(jié)合到特異性GFP抗體上;當(dāng)GFP 融合蛋白信號(hào)比較弱的時(shí)候,或者熒光蛋白變性后,具有再激活的作用。

 

在研究活細(xì)胞中蛋白定位和動(dòng)力學(xué)的過程中是不是會(huì)有如下的困惑:

 

1.固定樣品中細(xì)胞表達(dá)的熒光融合蛋白信號(hào)強(qiáng)度在生理表達(dá)水平通常很低?

2.熒光蛋白的耐光性和量子效率達(dá)不到超分辨顯微鏡的要求(如:3D-SIM, STED或 STORM/ PALM)?

3.許多細(xì)胞生物學(xué)方法如Hcl處理的BrdU檢測(cè),EdU-Click-It處理或者熱變性的熒光原位雜交(FISH)會(huì)干擾熒光融合蛋白信號(hào)的檢測(cè),需要重新激活GFP 信號(hào)?

 

 

優(yōu)點(diǎn):

優(yōu)點(diǎn)一:抗體好---------Nano-Boostern 采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段VHHS;具有分子量?。?5Kda)、穩(wěn)定(70℃仍保持穩(wěn)定),高親和力(高特異性性結(jié)合GFP蛋白),無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點(diǎn)等優(yōu)點(diǎn);GFP抗體可以特異性結(jié)合綠色熒光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65T,TagGFP,不與RFP衍生蛋白結(jié)合。

優(yōu)點(diǎn)二:Atto公司的熒光素,具有增強(qiáng)熒光的作用;

優(yōu)點(diǎn)三:作用效果好:

1、作為熒光增強(qiáng)劑使用;

2、對(duì)變性熒光蛋白具有再激活作用;

3、不僅能夠增強(qiáng)信號(hào),還能夠增加熒光蛋白熒光穩(wěn)定性。

 

優(yōu)點(diǎn)四:產(chǎn)品多:不僅有GFP booster,還有RFP booster;

 

Nano Booster 產(chǎn)品應(yīng)用:

1、產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)方法:免疫熒光(IF),免疫組化(IHC);

2、產(chǎn)品使用材料:細(xì)胞系,組織切片;

3、產(chǎn)品應(yīng)用方向:熒光顯微鏡,激光共聚焦顯微鏡,超分辨率顯微鏡(3D-SIM,PALM, STED,STORM);

實(shí)驗(yàn)結(jié)果改進(jìn)示例:

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用:

 

上圖:比較 HeLa 細(xì)胞系核表達(dá)的GFP-融合蛋白,GFP 信號(hào)增強(qiáng)(G FP-Booster_Atto488使用前和使用后)由用戶確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。

EdU-Click-iT? 處理會(huì)導(dǎo)致GFP 信號(hào)的毀壞。 GFP-Booster標(biāo)記了GFP 融合蛋白,因此有激活和加強(qiáng)熒光信號(hào)的作用(稀釋比例 1/200, 1 h at RT) (GFP-Booster with EdU-Click-iT? protocol)。下圖:GFP-Dnmt1 融合蛋白,三色熒光檢測(cè),同時(shí)檢測(cè)  紅色:5’ EdU-Click-iT? Alexa Fluor 594信號(hào);綠色,結(jié)合了GFP Booster 信號(hào);藍(lán)色,DAPI 信號(hào)(在EdU-Click-iT? 處理后GFP Booster)

 

 

Nano-booster主要產(chǎn)品見下表:

 

 

 

貨號(hào)

品名

規(guī)格

價(jià)格

GFP-Booster

Chromo tek

gba488-TS

GFP-Booster_atto488-TS

50 μg

2500

Chromo tek

gba488

GFP-Booster_atto488

100 μg

5400

Chromo tek

gba-647N

GFP-Booster-Atto 647N

100 μg

詢價(jià)

Chromo tek

gbdl-650-TS

GFP-Booster- Atto 647N

50 μg

詢價(jià)

Chromo tek

gba-594

GFP-Booster-Atto 594

100 μg

詢價(jià)

RFP-Booster

Chromo tek

rba594-TS

RFP Booster atto594 TS

50u g

2500

Chromo tek

rba594

RFP-Booster_atto594

100 μg

5400

Chromo tek

rbdl-650-TS

RFP-Booster- Atto 650ts

50 μg

詢價(jià)

Chromo tek

rba-700

RFP-Booster-Atto 700

100 μg

詢價(jià)

Chromo tek

rba-488

RFP-Booster-Atto 488

100 μg

詢價(jià)

 

 

備注:Invtrogen新推出的Click-iT? EdU檢測(cè)也是以檢測(cè)新合成DNA中摻入的核苷類似物為基礎(chǔ),但該方法所采用的核苷類似物是EdU,而且不是通過抗體檢測(cè),而是基于一個(gè)click反應(yīng) --銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價(jià)反應(yīng)。Click-iT檢測(cè)避免了BrdU檢測(cè)所需的苛刻處理?xiàng)l件,可避免DNA變性,維持樣本的形態(tài),因而提供了一種更可靠且更簡(jiǎn)單的方法進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。

 

DAPI,是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料,常用與熒光顯微鏡觀測(cè)。因?yàn)镈API可以透過完整的細(xì)胞膜,它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下,DAPI染劑是利用紫外光波長(zhǎng)的光線激發(fā)。當(dāng)DAPI與雙股DNA結(jié)合時(shí),大吸收波長(zhǎng)為358nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm,其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。 所以不會(huì)影響綠色熒光蛋白的觀測(cè)。

 

產(chǎn)品三:Chromobodies

 

ChromoTek公司的Chromobodies?是一種新的極其微小的細(xì)胞內(nèi)功能抗體。它是基于融合有熒光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfrom Evrogen)的來自羊駱抗體重鏈的抗原結(jié)合域結(jié)構(gòu)(VHH)。和普通抗體不同的是,這些創(chuàng)新的熒光納米探針可以使活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和進(jìn)程實(shí)時(shí)分析和可視化。因此,Chromobodies是做研究細(xì)胞內(nèi)研究包含高含量分析(HCA)的一種新的理想試劑。

 

除了穩(wěn)定細(xì)胞株,你也可以得到Chromobody?質(zhì)粒,它允許你創(chuàng)建自己的細(xì)胞系或瞬時(shí)表達(dá)Chromobody?。

 

所有Chromobody?結(jié)合域都是經(jīng)過精心挑選,以不干擾內(nèi)源性蛋白質(zhì)的功能,并提供了*的機(jī)會(huì)來標(biāo)記活細(xì)胞中天然蛋白。

 

產(chǎn)品形式:質(zhì)?;蛘呒?xì)胞系產(chǎn)品。

 

 

Chromobodies系列產(chǎn)品見下表:

 

Actin Chromobody

 

貨號(hào)

Chromo tek

品名

規(guī)格

價(jià)格

dcg

Chromo tek

Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-GFP

20μg

14900

dcr

Chromo tek

Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-RFP

20μg

14900

ccg

Chromo tek

Cell Cycle Chromobody? plasmid αPCNA GFP

20 μg

14900

ccr

Chromo tek

Cell Cycle Chromobody? plasmid PCNA RFP

20 μg

14900

lcg

Chromo tek

Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-GFP

20 μg

14900

lcr

Chromo tek

Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-RFP

20 μg

14900

acg

Chromo tek

Actin Chromobody? plasmid, αActin-GFP

20 μg

14900

acr

Chromo tek

Actin Chromobody? plasmid, αActin-RFP

20 μg

14900

 

 

產(chǎn)品系列四:

ChromoTek推出一系列高質(zhì)量常見抗體見下表:

 

熒光標(biāo)簽抗體

 

貨號(hào)

品牌

品名

規(guī)格

價(jià)格

3f5

Chromo tek

RFP antibody mouse monoclonal

100 μg

3900

5f8

Chromo tek

RFP antibody rat monoclonal

100 μg

3900

3h9

Chromo tek

GFP antibody, rat monoclonal

100 μg

3900

 

 

標(biāo)簽抗體

 

貨號(hào)

品牌

品名

規(guī)格

價(jià)格

6g9

Chromo tek

GST antibody, rat monoclonal

100 μ l

3900

6f7

Chromo tek

FLAG antibody, rat monoclonal

100 μg

3900

9E1

Chromo tek

c-Myc antibody, rat monoclonal

100 μg

3900

7c9

Chromo tek

HA antibody, rat monoclonal

100 μg

3900

 

 

目的蛋白抗體

 

貨號(hào)

品牌

品名

規(guī)格

價(jià)格

2e8

Chromo tek

Dnmt1antibody,ratmonoclonal

500μl

4900

2e8ts

Chromo tek

Dnmt1antibody,ratmonoclonal

125μl

2000

16d10

Chromo tek

PCNA antibody rat monoclonal

100 μg

4900

16d10ts

Chromo tek

PCNA antibody rat monoclonal

25 μg

2000

4b8

Chromo tek

Ago1 antibody, rat monoclonal

100 μg

5400

4b8ts

Chromo tek

Ago1 antibody, rat monoclonal

25 μg

2000

11a9

Chromo tek

Ago2 antibody, rat monoclonal

100 μg

5400

11a9ts

Chromo tek

Ago2 antibody, rat monoclonal

25 μg

2000

1c7

Chromo tek

RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD

5 ml

5400

1c7ts

Chromo tek

RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD

1 ml

2000

3d12

Chromo tek

RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1

5 ml

5400

3d12ts

Chromo tek

RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1

1 ml

2000

3e10

Chromo tek

RNA Pol II CTD, phos. Serine 2

5 ml

5400

3e10ts

Chromo tek

RNA Pol II CTD, phos. Serine 2

1 ml

2000

6d7

Chromo tek

RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4

5 ml

5400

6d7ts

Chromo tek

RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4

1 ml

2000

3e8

Chromo tek

RNA Pol II CTD, phos. Serine 5

5 ml

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